학부생 식품QC, 식품미생물학실험, 식품위생학실험 리포트 군것질 – 나노드롭(Nano-drop)사용법+결과해석법+경험담

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入力言語を確認してください。DNA / RNA / 260nm / 280nm 知って書こう！ >核酸抽出 | ジーダブリューバイテックPDF Print DNA / RNA / 260nm / 280nm 知って使おう！ * 제품 상세보기 http://www.afrontier.net/laboratory/product/item.php?it_id=1529473280 * 제품문의 02-2140-3363 | [email protected] DNA? RNA？？ 260 nm? 280 nm？？ 今は知って使おう！ 核酸定量理解する私たちはサンプルさえ入れればすぐに結果値を提供する核酸定量用吸光測定装置と非常に慣れている。しかしこの測定原理を正確に理解する···afrontier.net나노드롭은 Nucleic acids(ng/㎕), 260/280 ratio, 260/230 ratio의 값을 표현해주는 기계입니다.사용법은 아마도 많은 분들이 아시다시피 1.5 ㎕ 정도를 기계에 떨어뜨리면 흡광도를 기준으로 상기 내용을 측정하여 정량화해 주는 기계입니다.DNA를 prep했다면 이 과정을 통해서 제대로 이루어졌는지 평가할 수 있습니다.사용 전 컨트롤 값으로 DNase-RNase Free Water를 이용하여 촬영합니다.그 후에 시료를 넣으면 값이 나오게 됩니다.참고로 저는 사용 전후에 DNase-RNase Free Water를 사용하여 닦은 후 사용하고 있습니다.그리고 시료를 넣을 때 피펫을 2단까지 넣으면 기포가 생길 수 있기 때문에 주의하셔야 합니다.기계를 기동하면 어떤 종류의 DNA를 측정하고 싶은지 선택합니다.아마 대부분의 DNA가 ds(double stranded)-DNA이고 이를 선택하시면 됩니다.다른 종류를 선택할 정도의 분이라면 아마 이 게시물 내용은 다 알고 있을 정도로 전문가일 겁니다.나노 드롭은 260nm, 280nm, 230nm파장을 이용하고 결과 값을 산출합니다.DNA는 260nm에서 빛의 흡수도가 가장 높다고 알려졌으며, 나노 드롭도 260값을 바탕으로 DNA을 정량화합니다.즉, Nucleic acids(ng/㎕)은 1㎕주위에 얼마나 핵산이 들어 있는지 나타내는 것으로, 결과 농도에 prep한 DNA solution volume을 걸어 총 DNA배출량을 구할 수 있습니다.단백질 유기 용매, 오염 물질 등은 280nm에서 높은 흡수도를 나타내는, 260/280 ratio가 낮다는 것은 3개가 DNA purify가 낮다고 해석됩니다.230nm의 경우 페놀 등의 오염도를 확인함으로써 260/280 ratio가 낮은 것은 유기 용매에 의한 오염이 발생하는 것으로 나타납니다.이들의 설명은 저의 글보다 다른 분들의 글을 보거나 회사에서 제안하는 설명서를 자세히 나오고 있습니다.그래서 지금부터는 제 경험담을 털어놓고 싶어요.먼저 260nm, 280nm, 230nm에서 수행되는 측정은 약간의 모순점을 가지고 있습니다.그 이유는 DNA, 단백질, 유기용매 등이 다른 파장에서도 검출된다는 점입니다.특히 저파장에서 더 많이 검출된다는 것이지, 저파장만으로 검출되는 것은 결코 아닙니다.나노드롭 결과를 그래프만 봐도 바로 이해할 수 있을 것 같습니다.제가 DNA extraction하는 방법으로 사용하는 시약 중 하나는 흡광도가 280nm보다 260nm로 흡광도가 높습니다.이것은 260/280 ratio를 낮추는 것이 아니라 증가시켜 버립니다.즉, 오염도가 높아질수록 점점 결과가 개선되는 것처럼 보인다는 것입니다.그래서 제가 하고 싶은 말은 나노드롭을 믿지 말라는 거예요.다만 참고사항으로 보는 것이 좋다는 것입니다두 번째는 DNA 농도가 20ng/㎕보다 낮을 경우 결과 variation이 크고 경고 표시가 생깁니다.그리고 260/280 ratio 260/230 ratio도 정말 이상하게 나와요.결과를 믿지 마세요… 아! 그리고 만약에 농도가 너무 낮아서 고민이신 분들은 DNA prep할 때 마지막 DNA buffer의 양을 줄이는 것이 좋습니다.예를 들어 DNase-RNase free water를 평상시 50 ㎕ 사용하고 있으면, 30 ㎕로 줄이면 개선할 수 있습니다.물론… total의 용량은 같지만마지막은 qubit 4.0이라는 방법의 소개입니다.이 방법은 ds-DNA에 특이적으로 결합할 수 있는 형광물질을 넣은 후 형광량을 측정함으로써 손상된 ds-DNA도 측정할 수 있고 매우 작은 크기의 ds-DNA를 측정할 수도 있습니다. 나노드롭으로 측정한 결과보다 1/4~1/10만 검출되는 것을 보더라도 나노드롭의 결과가 DNA의 양을 매우 과대평가하고 있음을 알 수 있습니다.아니면 qubit 4.0이 안잡히는걸지도···그래도 저는 나노드롭을 계속 사용할 것 같아요.물론 교수님이 바꿀 마음이 없는 것도 있지만, 이 기계만큼 편리한 것은 없기 때문입니다.다만 여러분들이 DNA를 나노드롭으로 측정할 때 오류가 있을 수 있다는 점을 꼭 인지한 상태에서 실험해야 한다는 것을 꼭 말씀드리고 싶습니다.쓸데없이 삽질을 할지도 모릅니다···検出された言語がありません。

入力言語を確認してください。ナノドロップ(nanodrop one) 修正事項 221023修正 ナノドロップのせいで結果解釈もとても大変で私が調査して担当者の方に聞いた内容を共有します…m.blog.naver.com수정사항이 있어 링크를 첨부합니다.